ECL發(fā)光Marker
II（22-154 kD）
●產(chǎn)品編號(hào)及規(guī)格：
RTD6129 20T（100
μl）
● 儲(chǔ)存、效期及運(yùn)輸：
-20℃保存，有效期12個(gè)月，濕冰運(yùn)輸。
● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
ECL發(fā)光Marker是一種新型可視的 Western Blot（蛋白免疫印跡法）蛋白標(biāo)準(zhǔn)，可在同一膜上實(shí)現(xiàn)與目的蛋白同時(shí)顯示，而無(wú)需任何附加步驟和額外的試劑。該產(chǎn)品由8 種高純度的重組蛋白和4 種預(yù)染重組蛋白組成，指示的蛋白質(zhì)分子量大小為13-154 kD（~13、22、28、38、50、62、~70、78、113、~140，154
kD），其中~70 kD 為橙紅色預(yù)染條帶，~13 ，~28，~140
kD 為藍(lán)色預(yù)染條帶，方便動(dòng)態(tài)觀察蛋白質(zhì)電泳狀態(tài)或判斷蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)膜效果。22、28、38、50、62、78、113、154 kD 等8 種重組蛋白可以結(jié)合幾乎所有類型抗體，可與目的蛋白質(zhì)同時(shí)結(jié)合抗體并經(jīng)ECL顯色。
該產(chǎn)品為即用型，冰浴融解后即可使用。
● 使用說(shuō)明：
1．ECL發(fā)光Marker徹底溶解后，混勻上樣（3-5 μl）；
1.1：對(duì)于使用一抗為鼠源抗體建議取本產(chǎn)品5 μl進(jìn)行蛋白電泳；對(duì)于使用一抗為兔源抗體可以降低上樣量至3 μl；建議初次使用本產(chǎn)品時(shí)可以根據(jù)自身的實(shí)驗(yàn)條件和實(shí)驗(yàn)習(xí)慣通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定合適的上樣量，以獲得效果更佳的實(shí)驗(yàn)圖片；
1.2：Marker為即用型，不能100℃加熱處理，否則會(huì)導(dǎo)致蛋白條帶發(fā)生降解或失去效果
2．待測(cè)蛋白樣品上樣；
3．常規(guī)聚丙烯酰胺凝膠電泳；
4．參照具體儀器說(shuō)明，將蛋白轉(zhuǎn)移至合適的膜上；
5．參照目的蛋白抗體說(shuō)明書(shū)，進(jìn)行膜封閉、一抗孵育、二抗孵育及相應(yīng)的膜洗滌；
6．化學(xué)發(fā)光檢測(cè)，具體方法參照相關(guān)產(chǎn)品說(shuō)明。
● 實(shí)驗(yàn)示例：
● 問(wèn)題及解決：
|
問(wèn)題
|
原因
|
解決方法
|
|
條帶弱或者沒(méi)有條帶
|
上樣量偏少
|
加大上樣量
|
|
轉(zhuǎn)膜不充分
|
優(yōu)化轉(zhuǎn)膜條件，或使用蛋白預(yù)染 Maker判斷轉(zhuǎn)膜效果
|
|
檢測(cè)系統(tǒng)所用試劑失效
|
確認(rèn)使用的檢測(cè)試劑正常工作，優(yōu)化一抗、二抗及檢測(cè)底物的反應(yīng)條件（濃度、溫度、時(shí)間）
|
|
抗體沒(méi)有有效結(jié)合 ECL發(fā)光 Marker
|
不同來(lái)源的抗體及其亞型與 ECL發(fā)光 Marker的結(jié)合效果差異明顯，請(qǐng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)具體情況加以選擇
|
|
條帶過(guò)亮呈彌散狀，甚至無(wú)法區(qū)分條帶
|
ECL發(fā)光 Marker上樣量偏多
|
減少上樣量
|
|
抗體濃度過(guò)高
|
降低一抗、二抗使用濃度，優(yōu)化抗體反應(yīng)條件
|