DNA退火緩沖液(5×)
● 產(chǎn)品組成：
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貨號(hào)
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名稱
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規(guī)格
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貯存
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RTE3105
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DNA退火緩沖液(5×)
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5×1ml
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-20℃
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● 保存：-20℃
● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
DNA寡核苷酸退火緩沖液(Annealing
Buffer for DNA Oligos)簡(jiǎn)稱為DNA退火緩沖液，是一種可用于DNA oligo退火的緩沖液，可用于常規(guī)的DNA oligo的退火，尤其適合于較難退火的用于RNAi (也稱siRNA)質(zhì)粒構(gòu)建的DNA oligo的退火。該緩沖液能有效避免DNA oligo自身形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，并且兩條oligo退火后可以直接和經(jīng)酶切、純化的質(zhì)粒連接，轉(zhuǎn)化后可以得到大量的陽(yáng)性克隆。
本試劑操作簡(jiǎn)單，只需把待退火的DNA oligo和退火緩沖液按照一定比例混合后，置于PCR儀上進(jìn)行程序降溫，約90min即可完成。
● 操作步驟(僅供參考)：
1、 把待退火的DNA oligo用經(jīng)滅菌水配制成50μM，同時(shí)徹底溶解退火緩沖液（5×）備用。
2、 按如下反應(yīng)體系操作：
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順序
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組份
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體積
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1
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滅菌水
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40μl
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2
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退火緩沖液(5×)
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20μl
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3
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DNA oligo A(50μM)
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20μl
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4
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DNA oligo B(50μM)
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20μl
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Total
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100μl
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按照上述順序，依次加入并混勻，如果所用PCR儀沒(méi)有加熱蓋，可加入Mineral Oil防止液體揮發(fā)。
3、 按如下PCR儀的退火條件：
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步驟
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溫度
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時(shí)間
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作用
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1
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95℃
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2min
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Oligo充分變性
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2
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每90s下降1℃，降至25℃
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約90min
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程序退火
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3
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-20℃
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長(zhǎng)期保存
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暫時(shí)存放
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注：如果使用的PCR儀無(wú)梯度降溫功能，也可以95℃處理后自然冷卻至常溫。